Eesti Huumorimuuseumi tegevuseks on huumoriga seotud esemete nagu karikatuurid, ajakirjad, raamatud, filmid, heliplaadid, DVD, MC, kaardid, märgid, margid jne. kogumine, säilitamine ja eksponeerimine ning huumoriõhtute, karikatuuri ja sarži töötubade korraldamine, karikatuurivõistluste läbiviimine ning kõik muu, mis on seotud huumoriga, eeskätt kodumaise huumorikultuuriga.